凝胶迁移或电泳迁移率实验（EMSA-electrophoretic mobility shift assay）是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术，可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白，目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。通常将纯化的蛋白和细胞粗提液和32P同位素标记的DNA或RNA探针一同保温，在非变性的聚丙烯凝胶电泳上，分离复合物和非结合的探针。DNA-复合物或RNA-复合物比非结合的探针移动得慢。同位素标记的探针依研究的结合蛋白的不同，可是双链或者是单链。当检测 如转录调控因子一类的DNA结合蛋白，可用纯化蛋白，部分纯化蛋白，或核细胞抽提液。在检测RNA结合蛋白时，依据目的RNA结合蛋白的位置，可用纯化或部分纯化的蛋白，也可用核或胞质细胞抽提液。竞争实验中采用含蛋白结合序列的DNA或RNA片段和寡核苷酸片段（特异）， 和其它非相关的片段......

  凝胶迁移实验在理论上很简单也很快速，但要成功地进行凝胶迁移实验，需要优化一些参数，这主要受结合蛋白的来源和探针结合位点特点的影响。以下是需要优化的因素：抽提液的制备（核酸酶和磷酸酶污染会使探针降解），结合蛋白的浓度，探针的浓度，非特异性探针的浓度，缓冲液的配方和pH，聚丙烯凝胶电泳的特点和电泳条件，

  凝胶迁移实验需要的结合蛋白，可来源于纯化或部分纯化的蛋白，或粗的核和胞质抽提液。还必须制备同位素标记的DNA或RNA。一般，DNA核苷酸探针用32P和T4多核苷酸激酶来作末端标记，同位素标记的RNA用噬菌体RNA聚合酶和同位素标记的核苷酸在体外合成。Promega公司的Riboprobe/sup系统

  [实验原理]电泳是现在用于分离和纯化DNA片段的最常用技术。当装备一块“胶”即包含电解质的多孔支持介质并把它置于静电场中，DNA分子将向阳极移动，这是因为DNA分子沿其双螺旋骨架两侧带有含负电荷的磷酸根残基。当DNA长度增加时，来自电场的驱动力和来自凝胶的阻力之间的比率就会降低，不同长度的DNA片段

  实验步骤一、试剂配制1.  5×TBE缓冲液：450 mmol/L Tris-硼酸，10 mmol/L EDTA，pH值8.0。使用时将上述储存液稀释10倍至0.5×TBE缓冲液，可同时作为电泳及制胶用的缓冲液。二、制胶1.  根椐制胶量及凝胶浓度，在加有一定量的电泳缓冲液的三角锥瓶中，加入准确称量

  每个对照组的目的：1. 看光有探针，无另外的成分时，探针的位置，应该位于最下方。不然说明探针里面有杂质，影响电泳2. 这个是看蛋白和探针的结合，是实验目的3. 看探针结合的特异性。如果冷探针可以竞争结合，阻碍了标记的探针，说明2中的结合是特异的4. 目的和3相同。突变的冷探针应该对2的结果没有影响5

  常见的凝胶分离核酸或蛋白质的方法主要基于分子量大小和等电点的差异，DGGE则是增加另外一种分离参数，即分子构象。片段长度相同的DNA分子因碱基组成不同而具有不一样的解链温度（Tm），即使只有一个碱基对差异的等位基因间也存在不同的解链行为。DGGE是用尿素（Urea）和甲酰胺（Formamide）等变性

  凝胶电泳（英语：Gel electrophoresis）或称胶体电泳 是一大类技术，被科学工作者用于分离不同物理性质（如大小、形状、等电点等）的分子。凝胶电泳通常用于分析用途，但也可当作制备技术，在采用某些方法（如质谱(MS)、聚合酶链式反应(PCR)、克隆技术、DNA测序或者免疫印迹）检测之前部

  TFIIB与预启动复合物结合后，致使RNA聚合酶II和TFIIF结合到转录启始区。故TFIIB在预启动复合物的形成中有及其重要的作用。当用纯化的 TFIID作凝胶迁移实验时，poly dI-dC不用加入结合反应中。结合缓冲液含10%甘油，20mM Tris（pH8.0）， 10mM MgCl2,

  （1）什么是凝胶迁移或电泳迁移率实验？凝胶迁移或电泳迁移率实验（EMSA）是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术，可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白，目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。通常将纯化的蛋白和细胞粗提液和32P同位素标记

  1.AP1（激活蛋白1）：是一个转录调节因子，它结合的同源序列为5-TGAGTCA-3。当基因的启动子区域存在AP1的结合位点时，这些基因可以被诱导，比如用佛波酯可诱导蛋白激酶C（2,7）。在细胞中，AP1形成c-Jun或Jun相关蛋白的同聚双体，或者形成c-Jun或Jun相关蛋

  细胞的迁移运动不仅是细胞进行很多重要生理活动的基础，同时也是炎症反应和肿瘤发生等病理过程中的重要步骤和关键环 节。细胞迁移 (cell migration) 也称为细胞爬行、细胞移动或细胞运动，是指细胞在接收到迁移信号或感受到某些物质的梯度后而 产生的移动。细胞迁移为细胞头部伪足的延伸、新的黏附建立

  细胞的迁移运动不仅是细胞进行很多重要生理活动的基础，同时也是炎症反应和肿瘤发生等病理过程中的重要步骤和关键环 节。细胞迁移 (cell migration) 也称为细胞爬行、细胞移动或细胞运动，是指细胞在接收到迁移信号或感受到某些物质的梯度后而 产生的移动。细胞迁移为细胞头部伪足的延伸、新的黏附建立

  6．如何收拾洒落的汞？在实验室中我们常常会用到充汞压力计和水银温度计。如果操作不当或者是温度计破损的时候，都可能会发生“洒汞事故”。汞蒸气对于人体的危害是极大的，所以必须及时、彻底清理洒落的汞，不能任其流失。具体的清理方法比较多，我们大家可以依不一样的情况来选择使用。1）如果是吸收洒落少量的汞，那就能用普通滴

  凝胶层析又称为分子筛层析或凝胶过滤。具有分子筛作用的物质很多，如浮石、琼脂、琼脂糖、聚乙烯醇、聚丙烯酰胺、葡聚糖凝胶等。以葡聚糖凝胶应用最广，商品名是sephadex型号很多，从G10到G200，它的主要应用场景范围是：①分级分离各种抗原与抗体；②  去掉复合物中的小分子物质。如除盐、荧光素和游离的放射

  凝胶色谱法的固定相为多孔性凝胶类物质,流动相为水溶液或有机溶剂,它是根据不同组分分子体积的大小进行分离的。小分子可以扩散到凝胶空隙,由其中通过,出峰最慢;中等分子只可以通过部分凝胶空隙,中速通过;而大分子被排斥在外,出峰最快;溶剂分子小,故在最后出峰。全部在死体积前出峰;可对相对分子质量在100-10

  同无标记技术相比，利用荧光技术检验测试分子间相互作用的实验成本较低，例如荧光共振能量转移和凝胶迁移实验，无需昂贵的仪器便可完成结合分析。然而，基于荧光标记的检测技术也存在自己的局限性，像凝胶迁移实验就只能用来检测蛋白和核酸间的相互作用。那么在具体的实验中，研究人员该如何明智的选择合适的检测技术呢？不要着急，下

  琼脂糖凝胶电泳是用琼脂糖作支持介质的一种电泳方法。其分析原理与其他支持物电泳的最主要区别是：它兼有“分子筛”和“电泳”的双重作用。 琼脂糖凝胶具有网络结构，物质分子通过时会受到阻力，大分子物质在涌动时受到的阻力大，因此在凝胶电泳中，带电颗粒的分离不仅取决于净电荷的性质和数量，而且还取决于分子大小，这

  试剂、试剂盒蒸馏水乙醇甲酰胺胶的缓冲液亚甲基蓝十二烷基硫酸钠储存液TAE 缓冲液Tris 乙酸盐乙酸纳EDTA蓝色葡聚糖TEN 缓冲液40mer聚丙烯酰胺胶仪器、耗材解剖刀UV 灯过滤 UV 的安全破璃实验步骤一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂蒸馏水乙醇，95%甲酰胺 (使用安珀莱特单床离子交换树脂

  试剂、试剂盒 蒸馏水 乙醇 甲酰胺 胶的缓冲液 亚甲基蓝 十二烷基硫酸钠储存液 TAE 缓冲液 Tris

  试剂、试剂盒 蒸馏水乙醇甲酰胺胶的缓冲液亚甲基蓝十二烷基硫酸钠储存液TAE 缓冲液Tris 乙酸盐乙酸纳EDTA蓝色葡聚糖TEN 缓冲液40mer聚丙烯酰胺胶仪器、耗材 解剖刀UV 灯过滤 UV 的安全破璃实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂蒸馏水乙醇，95%甲酰胺 (使用安珀莱特单床离子交换

  实验步骤 操作 采用分子筛层析获得的洗脱图谱如图 23.1 A 所 75。零 洗 脱 体 积 (zero elution volu m e ) 是指上样于层析固定相的样品体积。没办法进入介质的分子的洗脱体积定义为无效体 积 V

  操作采用分子筛层析获得的洗脱图谱如图 23.1 A 所 75。零 洗 脱 体 积 (zero elution volu m e ) 是指上样于层析固定相的样品体积。没办法进入介质的分子的洗脱体积定义为无效体 积 V 。，它表示颗粒外部的体积。可以进人介质的分子的体积定义为总体积％, 它表示

  蛋白质纯化的层析技术中，凝胶过滤比较独特,它是基于蛋白质分子质量的相对大小而分离。与传统的过滤相反，通过凝胶过滤柱后,并没有一点蛋白质留存于其中。凝胶过滤优缺点明显;优点是，脆性蛋白质与层析固定相结合并不会破坏其功能;缺点在于,和凝胶不结合则限制层析的分辨率。作者： 伯吉斯等,主译：陈薇，本实验来

  电泳迁移率变动分析，又称凝胶阻滞实验，英文名electrophoretic mobility shift assay，简称EMSA。是体外利用电泳迁移率的变化来分析DNA与蛋白质相互作用的一种特殊的凝胶电泳技术。

  ArrayStarTM转录因子活性ELISA试剂盒能够迅速、灵敏地检测细胞核提取物中转录因子的DNA结合活性。试剂盒采用96微孔板，标记探针是生物素标记的双链寡核甘酸片段，含有转录因子的特异性DNA结合序列。当标记探针与细胞核抽提物一起孵育时，核抽提物中活性形式的转录因子与探针特异性结合，形成转录因

  1. 凝胶的选择 根据层析物质分子量的大小选不一样型号的凝胶，如除盐和除游离的荧光素，则可选用粗、中粒度的G25或G50，G250多用于分离蛋白质单体，G200多用于分离蛋白质凝胶聚合体等。 2. 凝胶的预处理 称取适量的凝胶加入过量的缓冲液在冰箱（或室温）中充分膨胀，或在沸水中煮，膨胀

  Transwell法的步骤：先把小室擦干净后在超净工作台照紫外过夜。如新的小室省略此步。下一步将小室倒扣并小室的底部外侧滴加0.1%（还是1%记不清了）的明胶室温放置20-30分钟。这是将细胞消化下来，调浓度。拿出24孔板加600ml的含有刺激因子的培养基。小室上还未干的明胶甩掉，加细胞放入24孔板

  凝胶过滤层析（gel filtration chromatography）法又称排阻层析或分子筛方法，主要是根据蛋白质的大小和形状，即蛋白质的质量进行分离和纯化。层析柱中的填料是某些惰性的多孔网状结构物质，多是交联的聚糖类物质，使蛋白质混合物中的物质按分子大小的不同进行分离。实验方法蛋白质的